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對于生物大分子藥來說因其成分無法采用最終滅菌工藝進行加工，而只能采用部分或全部無菌生產(chǎn)工藝進行生產(chǎn)。藥液的灌封必須在無菌的環(huán)境下進行，并盡可能采用自動化設備，減少人工干預，采用隔離器的將大大降低污染的風險。
器具準備
根據(jù)部件與產(chǎn)品是否接觸，一般分為：直接接觸、間接接觸和不接觸。根據(jù)部件與產(chǎn)品的接觸方式結(jié)合CCS，制定部件清潔、滅菌(消毒)的策略。對于與產(chǎn)品直接接觸或間接接觸的，通常在使用后進行清潔、消毒，使用前清潔、滅菌(消毒)。不與產(chǎn)品接觸的，根據(jù)相關(guān)的評估來確定是否需要進行清潔、滅菌(消毒)，進入無菌區(qū)的不管是否接觸都必須進行清潔、滅菌(消毒)。
目前大部分的企業(yè)開始采用SUS，比如攪拌袋、儲液袋、灌裝系統(tǒng)等等，這些SUS根據(jù)用戶需求進行定制，使用之前輻照滅菌。其他的部件，如震蕩鍋，膠塞軌道等等，這些部件與膠塞接觸，是間接接觸部件，通常也需要進行清潔、滅菌(消毒)后使用。每家對這些部件的風險評估結(jié)果不同，處理的措施也不盡相同，比如有的直接使用WFI進行清洗，有的則考慮到在使用前這些部件在環(huán)境中存放了一段時間，使用之前會使用一定濃度的NaOH溶液進行處理，然后清洗，終淋，干燥后包裝，濕熱滅菌。
不與產(chǎn)品接觸的，比如記錄紙，筆等等，這些進入B級區(qū)也同樣需要進行滅菌(消毒)，目前已有記錄紙是可以進行濕熱滅菌的。組成筆的材質(zhì)通常不能采用濕熱滅菌，市面上有號稱是無菌潔凈室使用的筆，但是還是建議，在潔凈室空間滅菌前，通過一定的恰當?shù)南痉绞竭M入無菌區(qū)，然后再與空間滅菌一起進行滅菌。
濕熱滅菌
濕熱滅菌的工藝技術(shù)要點在制劑生產(chǎn)--濕熱滅菌進行了簡單介紹，可供參考。
除菌過濾
在商業(yè)化生產(chǎn)中，除菌過濾一定是經(jīng)過驗證的，驗證包括兩個部分：除菌過濾工藝驗證、除菌過濾器驗證，詳見制劑生產(chǎn)--除菌過濾。最終灌裝通常采用雙重過濾或者冗余過濾，從CCS角度考慮，建議采用一次性灌裝系統(tǒng)，避免污染與交叉污染。考慮到一次性灌裝系統(tǒng)的生產(chǎn)過程、加工環(huán)境、加工工藝以及待過濾產(chǎn)品特性等，使用一次性灌裝系統(tǒng)需要考慮可見異物，通常在正式生產(chǎn)前取樣檢查可見異物，檢查合格后進行正式灌裝，也有的企業(yè)做法是使用產(chǎn)品作為潤洗液對一次性系統(tǒng)進行潤洗，但是在PC、PV階段需要驗證潤洗液的使用量。
除菌過濾使用之前必須是經(jīng)過滅菌的，有些過濾器是事先與過濾系統(tǒng)的其他組件一起組裝好然后進行輻照滅菌，使用之前必須檢查包裝的完整性。而有些是采用離線濕熱滅菌的，使用之前進行無菌裝配。關(guān)于完整性測試，各國的要求不太一樣，最新的EU GMP附錄一保留了PUPSIT，具體的要求需要看產(chǎn)品是銷往哪個國家。
其他要求：
1、環(huán)境：生產(chǎn)之前按相應的程序進行清場，檢查房間的清潔、消毒有效期。房間的溫濕度、壓差等應符合要求。不同潔凈度級別的壓差，相同潔凈度級別不同功能間的壓差應符合要求。環(huán)境的清潔與消毒必須有效，否則清潔消毒可能變成了污染。有的企業(yè)在對環(huán)境清潔消毒時，使用所謂的雙桶系統(tǒng)，抹布在第一個桶中沾取消毒劑進行擦拭，然后在第二桶中進行涮洗，再在第一個桶中沾取，其實如此反復第一個桶會被污染且逐漸加重，所以最終消毒液變成了污染源。如果避免這種情況，就必須斷絕這種情況，擦拭一定面積以后的抹布就要更換掉，不再將用過的抹布回到消毒液桶中重新沾取消毒液。如果使用的消毒液有殘留，那么也應該有相應去殘留規(guī)程，避免造成污染與交叉污染。
2、設備：設備是否在清潔有效期內(nèi)，設備的驗證/確認是否在有效期內(nèi)，支持設備運行的公用系統(tǒng)是否符合要求。
3、物料：按照生產(chǎn)指令要求，領取原液，內(nèi)包材，SUS等等，物料均經(jīng)過批準放行;灌裝用的部件等經(jīng)過濕熱滅菌的物品，在使用之前檢查是否在滅菌后保存有效期內(nèi);SUS使用之前檢查是否完好，無破損。
無菌灌裝環(huán)境
灌裝是在無菌的環(huán)境中進行灌封，并采用懸浮粒子在線監(jiān)測系統(tǒng)(包括浮游菌、沉降菌)實時監(jiān)測。采用隔離形式包括RABS(限制進出隔離系統(tǒng))和Isolator(隔離器)兩種，無菌潔凈室常見的是采用ORABS(開放式限制進出隔離系統(tǒng))形式，這種形式背景環(huán)境為B級，Isolator(隔離器)背景為C/D級。不管采用哪一種形式進入無菌區(qū)產(chǎn)品、物料、物品等必須經(jīng)過滅(除)菌。
灌裝機稱重模式
目前的灌裝機基本上包含三種稱重模式：無在線稱重、半稱重、全稱重。所謂的半稱重是指在灌裝過程中按照設定的比例進行抽樣稱重，這種機型通常在開始和快結(jié)束時采用全稱重。對于無在線稱重的機型，靠人工控制抽樣間隔，取樣后采用離線的萬分之一天平進行稱重，確定裝量，如果裝量不準確需要手動調(diào)節(jié)裝量，那么沒有抽到的產(chǎn)品灌裝是否符合要求是未知的。
半稱重機型設定好目標灌裝量、警戒限和糾偏限后，灌裝機在灌裝過程中按照灌裝比例抽樣進行稱重，當抽樣稱重在警戒限范圍內(nèi)時，有些設備不做調(diào)整，有些先進一些的設備會統(tǒng)計趨勢，根據(jù)趨勢進行調(diào)節(jié)。當抽樣稱重達到糾偏限時，產(chǎn)品被剔除，并反饋調(diào)節(jié)灌裝量。同樣這里也存在一個問題，抽樣的產(chǎn)品如果超過了糾偏限，那么從上一次到這一次抽樣之間的產(chǎn)品是否存在不符合要求的是未知的。所以采用此種機型的，在設計上要考慮一旦出現(xiàn)這種情況，如何能分辨出哪些產(chǎn)品是這兩個抽樣之間灌封的，如果能夠隔離出來，后續(xù)進行相應的處理。
采用全稱重模塊的機型，就能保證灌裝量是符合要求的嗎?未必，這與很多因素有關(guān)，如灌裝機采用的灌裝形式，比如采用蠕動泵、柱塞泵還是采用時間-壓力法等;設備不管是在高速還是低速運行下，運行是否穩(wěn)定;稱重模塊的精度是否足夠;是否有其他因素影響稱重模塊，比如隔離器里的風壓，設備產(chǎn)生的靜電。設備的壓差如果在一個相對大一些的范圍波動，那么灌裝出來的產(chǎn)品裝量也是波動比較大的，因此要保證穩(wěn)定的裝量，應通過調(diào)節(jié)確保隔離器的壓差維持相對的恒定。靜電也是影響稱重模塊的一個重要原因，有關(guān)研究表明，當產(chǎn)生的靜電越大時在線稱重模塊稱量的重量偏離實際重量越多，使用直流除靜電棒后，通過調(diào)試，能夠使灌裝裝量保持相對穩(wěn)定，偏離實際值較小，達到可接受的范圍。
蠕動泵灌裝系統(tǒng)
大分子生物藥的灌裝根據(jù)產(chǎn)品的特性，通常選擇蠕動泵進行灌裝，減少對產(chǎn)品質(zhì)量的影響。蠕動泵灌裝影響灌裝精度主要體現(xiàn)在蠕動泵的精度，如泵頭的加工精度，控制系統(tǒng)等，還跟硅膠管有關(guān)系，硅膠管的壁厚，壓縮后能夠迅速回彈等等。影響灌裝精度的不僅僅跟這些因素有關(guān)，比如產(chǎn)品的粘度，越是高濃度的制劑越不容易灌裝，停機時間的長短，灌裝針的選擇，回吸等等都會影響高濃度制劑灌裝的裝量與精度。關(guān)于高濃度制劑的灌裝，可參考以下文獻：
1、Filling of High-Concentration Monoclonal Antibody Formulation into Pre-Filled Syringes
2、Filling of High-Concentration Monoclonal Antibody Formulation into Pre-Filled Syringes-Investigating Formulation-Nozzle Interactions To Minimize Nozzle Clogging
3、Filling of High-Concentration Monoclonal Antibody Formulation Investigating Underlying Mechanisms That Affect Precision of Low-Volume Fill by Peristaltic Pump
隨著現(xiàn)在工業(yè)的進步，蠕動泵的精度也在逐漸的提高，目前的灌裝精度可以滿足需求。
灌裝看似一個很簡單的過程，但實際上可能會對產(chǎn)品產(chǎn)生致命的影響。
1、含量
原液經(jīng)過解凍，混合混勻后進行除菌過濾，或者預過濾。在這一步中有些是需要進行稀配，添加賦形劑等，有些是直接進行混合后混勻，如果原液混不勻，會導致批次內(nèi)產(chǎn)品含量不均勻。
2、無菌
無菌藥品無菌是關(guān)鍵，非最終滅菌小容量注射劑的灌裝必須經(jīng)過APS的驗證，評價無菌保證系統(tǒng)的有效性。按照滅菌決策樹，生物大分子藥物無法進行濕熱滅菌，只能選擇除菌過濾，那么除菌過濾是關(guān)鍵。對于最終除菌過濾，有時候為保證除菌過濾的效果，前面會增加預過濾，具體工藝需要根據(jù)實際情況進行相關(guān)的工藝開發(fā)進行確定。
3、內(nèi)毒素
內(nèi)毒素是無法通過除菌過濾去掉的，一旦超標產(chǎn)品只能廢棄。而原液進行混合時有可能會有敞口的操作，比如原液采用瓶裝，或者原液采用儲液袋進行分裝，但是合并時使用CPC快接頭進行對接，盡管這種操作風險很小，但是依然需要重點關(guān)注操作的過程。很多廠家原液合并的過程是在C級區(qū)，關(guān)鍵的對接與敞口操作會在層流下進行。
4、蛋白質(zhì)含量
除菌過濾時，過濾器會吸附一定的蛋白，從而影響除菌過濾后產(chǎn)品蛋白質(zhì)的含量。過濾器的膜材質(zhì)不僅僅會吸附蛋白，還可能會吸附輔料，如吐溫等，因此會進行除菌過濾的相關(guān)驗證與研究。
5、可見異物
可見異物/不溶性微粒的控制是保證注射劑安全使用的一項重要指標，除了產(chǎn)品本身因素以外，整個灌裝系統(tǒng)及過程也可能會引入可見異物(外源性)。如西林瓶清洗不干凈，經(jīng)隧道烘箱烘干時玻璃內(nèi)壁脫落，西林瓶在軌道傳送過程中相互的碰撞產(chǎn)生的顆粒。產(chǎn)品經(jīng)過SUS時，SUS中的可見異物進入到產(chǎn)品中等等。對于水針產(chǎn)品來說，軋蓋后通過燈檢，對于關(guān)鍵缺陷100%剔除，主要缺陷和次要缺陷按照相應的要求剔除。由于水針能夠看到液體內(nèi)部的情況，而對于凍干產(chǎn)品來說，凍干后的產(chǎn)品是無法看到內(nèi)部的情況的，可見異物的檢查通常是按照程序進行取樣，復溶后檢查可見異物，由于是破壞性的，因此無法進行100%的檢測。據(jù)了解，目前有采用所謂射線檢查凍干產(chǎn)品的設備，能夠檢查cake內(nèi)部的異物，但是效果不是很好，同時射線對產(chǎn)品的影響也未知。目前還有的做法是，在灌裝前通過視覺系統(tǒng)檢查西林瓶內(nèi)的可見異物，如果發(fā)現(xiàn)進行剔除。凍干產(chǎn)品在凍干前產(chǎn)品是液態(tài)的，在進入凍干箱之前使用視覺檢查系統(tǒng)進行檢查，不過目前這樣做的非常少。
對于SUS可能帶來的可見異物，一般從幾個角度進行控制，比如廠家會對使用的硅膠管等組件使用WFI進行沖洗，在高級別的環(huán)境中進生產(chǎn)組裝等。對于使用端，使用前使用潤濕也進行潤洗，正式灌裝前檢查可見異物等措施。
6、裝量
產(chǎn)品的實際裝量是標示量與補加量的總量，由于產(chǎn)品從西林瓶中吸取出來后會有殘留，為了能夠保證用藥量需要補加一定的量，參照藥典要求，不同的標示量，易流動液體與粘稠液體的補加量不同。
裝量的精確控制是灌裝機的重要指標之一，在進行灌裝機PQ時應確認灌裝機的精度，保證裝量符合要求，前面也提到稱重模塊也是影響裝量的重要因素。目前不管是半稱重機型還是全稱重機型是帶有反饋調(diào)節(jié)的，前面有介紹了半稱重機型的裝量控制策略。全稱重的機型對每一瓶都進行稱重，從而能夠保證每一瓶的裝量都符合要求，如果預算充足的話還是建議采用全稱重機型，全稱重的機型也將是發(fā)展的趨勢。
灌裝機的很多參數(shù)也將影響裝量，制劑生產(chǎn)--灌裝曲線的研究有部分介紹，可供參考。
參照《中國藥典》三部通則0102注射劑部分，裝量差異是每瓶(支)的裝量與平均裝量相比較(如有標示裝量，則與標示裝量相比較)。影響灌裝裝量差異或灌裝精度的因素比較多，后面會單獨進行介紹。
7、其他影響因素
影響制劑質(zhì)量的因素不僅僅以上幾個方面，還包括滲透壓，pH，不溶性微粒等等。
不管是RABS還是Isolator，無菌區(qū)的操作均應通過手套進行，RABS在開始前生產(chǎn)前會開啟安全門傳遞物品，而Isolator不可以。手套在隔離屏障系統(tǒng)中起著很關(guān)鍵的作用，如果手套破損或者受到污染，那么產(chǎn)品很可能因此受到影響。了解了它的重要性之后，需要制定相應的管理策略，使用前使用后進行完整性測試，定期進行滅菌。在正常生產(chǎn)過程中可能多人使用同一個手套箱，在使用之前應對人員手部進行消毒，然后再伸進隔離屏障的手套中。這里需要注意的是，使用手套應盡量的溫柔一些，當手伸進隔離屏障的手套中的時候，手套內(nèi)部壓力會短時增大，形成超壓，手套在使用過程中如果不注意被尖銳的東西扎到等造成損傷。盡管有研究表明小于0.6mm的孔，無菌區(qū)受到微生物的污染風險可能性較小，但是這個研究不是提供定量的數(shù)據(jù)，企業(yè)可根據(jù)相關(guān)研究與QRM制定自己的控制措施。
